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超聲波細胞破碎儀廠家介紹常見的細胞破碎法

 更新時間:2015-08-13 點擊量:1226
   超聲波細胞破碎儀是zui常見的細胞破碎儀器,上海生析超聲儀器有限公司是專業的超聲波細胞破碎儀廠家,本文就給大家介紹下常見的細胞破碎方法。

  超聲波細胞破碎儀廠家介紹常見的細胞破碎的方法有:

  (一)物理破碎法,指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細胞破碎開來。

  1.用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂(借助超聲的震動力破碎細胞壁和細胞器)。

  機制:可能與強聲波作用溶液時,氣泡產生、長大和破碎的空化現象有關,空化現象引起的沖擊波和剪刀力使細胞裂解。

  超聲波細胞破碎儀的效率取決于聲頻、聲能、處理時間、細胞濃度和細胞類型等。

  2.高壓破碎:細胞懸浮液從高壓室的環狀隙噴射到靜止的撞擊環上,被迫改變方向經出口管流出。此過程中細胞經歷了高速造成的剪切的碰撞及高壓到常壓的變化,從而破碎釋放內含物。

  這是一種溫和的、*破碎細胞的較理想的方法。

  3.反復凍融法:將細胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復幾次,由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結構破碎。

  (二)化學破碎法,指利用甲醛、丙酮等有機溶劑或表面活性劑作用于細胞膜,使細胞膜的結構遭到破壞或透性發生改變 。

  有些動物細胞,例如腫瘤細胞可采用十二烷基磺酸鈉(SDS)、去氧膽酸鈉等細胞膜破壞。濃度一般為1mg/ml。

  (三)機械破碎法,是指利用搗碎機、研磨器或勻漿器 等將細胞破碎開來。

  1. 高速組織搗碎:將材料配成稀糊狀液,放置于筒內約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調速器先撥至zui慢處,開動開關后,逐步加速至所需速度。此法適用于動物內臟組織、植物肉質種子等。

  2. 玻璃勻漿器勻漿:先將剪碎的組織置于管中,再套入研桿來回研磨,上下移動,即可將細胞研碎,此法細胞破碎程度比高速組織搗碎機為高,適用于量少和動物臟器組織。

  (四)酶學破碎法,選用合適的酶,使細胞壁遭到破壞,進而在低滲溶液中將原生質體破碎開來。

  細菌細胞壁較厚,可采用溶菌酶處理效果更好。

  裂解液標準配方:50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在這個pH范圍內比較好發揮作用) 。

  無論用哪一種方法破碎組織細胞,都會使細胞內蛋白質或核酸水解酶釋放到溶液中,使大分子生物降解,導致天然物質量的減少,加入二異丙基氟磷酸(DFP)可以抑制或減慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺酰氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酶活力,但不是全部,而且應該在破碎的同時多加幾次。

  以上是細胞破碎的常見方法,更多相關問題,咨詢超聲波細胞破碎儀廠家

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